利用
線粒體染色試劑盒檢測線粒體中ROS的水平，嚴格按照說明書進行操作，各組分別取100μL線粒體，加入等體積10 mol/L H2DCFDA室溫孵育30 min，利用酶標儀檢測通過490 nm(A490)吸光值表示ROS的含量。線粒體呼吸鏈復合物Ⅳ活性測試盒檢測HT22細胞線粒體復合物Ⅰ和Ⅳ活性按照前述方法分組和提取線粒體，采用試劑盒檢測線粒體呼吸鏈復合物Ⅰ和Ⅳ活性。
以細胞質染色呈棕黃色或黃色為陽性，染色結果采用Image-pro6.0圖像分析軟件進行分析，高倍鏡(×400)下每張切片隨機選擇5個視野，測定吸光度值(A值)并取其平均值作為該切片的A值。Omi/HtrA2的胞內轉位間接免疫熒光雙染色法，在激光共聚集顯微鏡下觀察。取制備好的10μm厚的冷凍切片，采用免疫組織化學法，嚴格按免疫組織化學試劑盒和線粒體染色試劑盒說明書操作。線粒體的染色為綠色熒光,Omi/HtrA2的染色為紅色熒光,分別用綠色及紅色通道掃描，后合成。以胞質中線粒體綠色熒光與Omi/HtrA2紅色熒光重疊合成黃色為陰性細胞,代表Omi/HtrA2尚未發生胞內轉位。反之，胞質中紅色熒光與綠色熒光未發生重疊而相互分離為陽性細胞,代表Omi/HtrA2已經發生胞內轉位,隨機取多個視野計數共200個細胞中的陽性細胞,以其比例做統計分析。統計學處理采用SPSS 17.0軟件對其行單因素方差分析,結果用x珋±s表示,組間比較采用LSD法,P<0.05為差異有統計學意義。2結果2.1肺組織形態結構變化對照組早產鼠1 d、3 d、7 d肺組織未見病理改變,肺泡結構逐漸發育成熟。高氧組早產鼠高氧暴露1 d時,與對照組比較差異無統計學意義，高氧暴露3 d時,逐漸出現肺泡壁毛細血管充血擴張,肺泡腔及間質內有少量炎性滲出，高氧暴露7d時，肺損傷較嚴重，肺泡腔和間質內大量炎性細胞浸潤，肺泡間隔增厚，肺泡數目減少，且結構簡單化和囊泡化，間質內膠原樣物質增生，部分肺組織可見肺泡萎縮和肺不張。與高氧組相比，二氮嗪組肺組織受損得到改善。
更新時間：2018-08-23
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