Quick Cell支原體快速檢測試劑盒（細胞培養）使用說明書

發布時間：2017/11/16

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Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細胞培養)

產品名稱	貨號	規格	保存	價格(元)
Quick Cell 支原體快速檢測試劑盒(細胞培養)	C4056L1060	50 T	-20℃	1250

產品描述

《Quick Cell快速支原體檢測試劑盒》主要用于檢測細胞培養上清或別的液體樣品（如血清）中是否含有支原體污染，該試劑盒僅用于基礎科研。

哺乳動物細胞的培養，支原體（Mycoplasma）污染是個世界性的問題。支原體污染幾乎可以改變細胞的所有參數，導致實驗結果的不準確、甚至*錯誤。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養都要進行支原體檢測。本試劑盒可以檢測：（1）M.Hyorhinis、（2）M.Fermentans、（3）M.Arginini、（4）M. hominis、（5）M. orale、（6）M. salivarium、（7）M.pirum、（8）Acholeplasma Laidlawii、（9）M. agalactiae、（10）M.bovis、（11）M. buccale、（12）M. arthritidis、（13）M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細胞的支原體（注：M.為Mycoplasma的縮寫）。以上13種支原體約占細胞支原體污染的99%以上，本試劑盒產品全部可以檢測。絕大多數支原體污染集中于前8種。注意：本試劑盒無法檢測Ureaplasma Urealyticum支原體！Ureaplasma Urealyticum在支原體污染種極其罕見。

與PCR法檢測支原體比較，本試劑盒產品優勢優勢顯著：

比較內容	支原體檢測PCR法	Quick Cell 快速支原體檢測試劑盒
操作時間	3小時	1小時
是否需要樣品處理	樣品需預處理，DNA提取	無需樣品處理，直接使用上清
靈敏度	靈敏度低	較PCR法提高1000倍
是否需要電泳	需要電泳及染色	不需電泳，目測結果

試劑盒組成

（1）溶液Ⅰ：1150 μL （50次檢測）

（2）溶液Ⅱ：50 μL（50次檢測）

（3）溶液Ⅲ：指示劑，50 μL（50次檢測）

（4）陽性支原體DNA：50 μL

（5）礦物油：1500 μL

使用方法

1. 待測樣品的準備：為了準確判斷細胞是否有支原體的污染，待測的細胞培養液樣品來源于至少培養三天且匯合度在70-90%左右的細胞培養上清（貼壁細胞），無需離心。懸浮培養的細胞也需要在換液傳代后，至少讓細胞生長3天再取培養液進行檢測，也無需離心。哺乳動物細胞的存在不會影響檢測結果。

注：收集的待測細胞培養液樣品如果不立即檢測，請放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存一個月，在-80℃可以長期保存。此外，為了節約檢測成本，可以將不同時間收集的樣品放于-20℃或-80℃冰箱保存，而后一起檢測。

2. 反應體系的配制

表1：恒溫反應體系的配制

組份	理論單個樣品用量	樣品總數	總體積
溶液Ⅰ	23 μL	N	23×N×1.08 μL
溶液Ⅱ	1 μL	N	1×N×1.08 μL
溶液Ⅲ	0.18 μL	N	0.18×N×1.08 μL

（1）將溶液Ⅰ、溶液Ⅲ從-20℃冰箱中取出，待其融化后（可在37 ℃ 水浴內放置5-10分鐘以幫助融化），從-20℃冰箱中取出溶液Ⅱ置于冰上。吹吸均勻后，按表1比例，混合溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ。如有多個樣品，為了防止移液誤差，建議溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系數1.08，保證每個反應管中的反應液足量。從配液開始的所有步驟，均在冰上操作。

舉例：如果待測樣品為3個（加上1個陰性和1個陽性對照），則樣品總數為5個。溶液Ⅰ的總體積為23×5×1.08=124.2μL，溶液Ⅱ的總體積為1×5×1.08=5.4μL，溶液Ⅲ的總體積為0.18×5×1.08=0.972 μL將溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ混合均勻。

注：溶液Ⅱ必須一直在-20 ℃冰箱中保存，并在操作時置于冰上。溶液Ⅱ即使在-20 ℃條件下仍為液態，不需置于室溫。

（2）將上述配制好的反應體系，吹打均勻后，按每管24 μL分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量保證每管的反應液體積一樣。 PCR管應該使用透明度良好的薄壁PCR管。

（3）往測試管（Test）中加入1μL待測細胞培養液；往陽性對照管（Positive）中加入1 μL陽性支原體DNA；往陰性對照管（Negative）中加入1μL滅菌水；反應液的總體積為25 μL。

注1：裝有陽性支原體DNA的螺口管開蓋之前，用力甩一下，或者用迷你離心機即可。

注2：進行反應體系配制的房間，與進行樣品前處理、加陽性對照DNA、樣品DNA的房間分開。

3. 反應

PCR儀設置程序：61℃，60 min；10℃, forever；熱蓋溫度，100 ℃。

注意：若實驗室反應場所沒有PCR儀，可用水浴鍋代替，水浴鍋顯示溫度與實際溫度的溫差不超過0.5℃，另須往每個反應管內加入25μL礦物油，以防止水份揮發，然后蓋上蓋子，將反應管插入帶孔的漂板內，放入已經升溫到61℃的水浴內，準確反應60分鐘。

4. 結果判斷

61℃反應60分鐘后，立刻取出反應管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過反應管溶液顏色的變化，即可判斷檢測結果。如果溶液為藍綠色，則說明有支原體污染；如果為紫紅色，則說明沒有支原體污染（如圖1）。

注：在61℃反應的時間必須準確計時，zui多不得超過5分鐘，以免出現假陽性。必須在反應后2小時內進行結果判斷，避免室溫下擴增反應進行，影響結果判別。

注意事項

1．必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體，盡量用新購移液器、新開封的槍頭操作；整個操作過程，佩戴口罩，不要開口說話。由于本試劑盒非常靈敏，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽性。

2．使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭，至少應該使用新開封的吸頭。

3．檢測過程中，用過的各類吸頭、離心管務必小心處理，應裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶內。反應后的PCR管，不要開蓋，用過后將其用自封袋密閉，扔到遠離細胞房的獨立垃圾桶內。

4．如果細胞被支原體污染，可以選購本公司或其他供應商提供的去除試劑今早去除。

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