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TECHNICAL ARTICLES
更新時間：2022-06-30
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細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。定義 隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。
下文中將從多個維度，介紹細胞轉染的各類小知識。
哺乳動物細胞表達系統能促使在其內表達的蛋?正確折疊并進行復雜修飾，表達的蛋?更接近真實自然狀態，便于模擬真實細胞內環境，進行蛋白功能研究。把目的基因轉入哺乳動物細胞，表達?產蛋?通常有兩種?式：瞬時轉染與穩定轉染（構建穩定細胞系），如圖1.所示。
瞬時轉染與穩定轉染有如下特點：
瞬時轉染 | 穩定轉染 | |
基因融合 | 游離存在于染色體外（episome） | 整合于細胞染色體上 |
表達快慢 | 24-72小時內可獲得表達產物 | 數天，需經過基因融合、培養、篩選 |
待轉基因 | 不需要線性化，超螺旋結構更容易轉染和表達 | 需要線性化，便于整合到宿主細胞 |
抗性選擇 | 待轉質粒基因不需帶抗性 | 待轉基因必須帶有抗性，便于篩選克隆 |
成本 | 實驗室成本低 | 實驗室成本高，得到穩定株后表達成本低 |
用途 | 蛋?質的?規模合成 | 蛋?質?規模合成，遺傳調控機制研究，長期藥理學研究 |
細胞轉染方法可分為化學法，物理法，生物法，也可把化學法、物理法稱為非病毒載體，生物法稱為病毒載體。不同的轉染方法可分別用于瞬時轉染和穩定轉染，不過效率與效果不同。
病毒介導轉染是目前在細胞治療等應用中有前景的方向，化學法，物理法在實施過程中，對細胞均有一定程度的損害，所以用于細胞治療藥物的研究受到限制。病毒介導轉染也叫侵染。人類有漫長的和病毒斗爭的歷史，對病毒研究較為清晰，改造后病毒轉染結果相對可以控制。目前使用病毒載體的藥物已經有多個上市，比如SMA基因治療藥物采用AAV病毒遞送，一針200萬美元，已上市3個CART用慢病毒或逆轉錄病毒（HIV的變種）來轉入基因，已上市的埃博拉病毒疫苗用AD26病毒載體等。
病毒載體的制備是目前CRO服務中的重要內容，病毒載體的生產（如圖）先用大腸桿菌等生產出質粒，然后把多種質粒（通常是三質粒或四質粒系統）通過轉染進入細胞中，表達出病毒載體的外殼蛋白、功能蛋白等，然后組裝成含目的基因的病毒載體，通過純化工藝獲得工具病毒，工具病毒感染細胞，腺病毒可于轉染成功2小時后即可檢測到表達產物，逆轉錄病毒則需要經過多輪賽選，選擇基因整合進細胞基因組的穩定細胞株，用于后續研究。
Ps：李記生物EZ Trans細胞轉染試劑可用于各類病毒包裝。
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